جداسازی و تخلیص اجزا پروتئینی عصاره آرتمیا و مطالعه اثرات آن بر روی رشد و پرولیفراسیون و القاء آپوپتوزیس سلول های لوسمیک انسانی hl-60

آرتمیا یک خرچنگ دریایی متعلق به آب های شور می باشد که بیشترین توانایی تحمل استرس را در بین موجودات چند سلولی دارا می باشد.آرتمیا به شرایطی مانند شوری بسیار زیاد آب , کاهش فشار اکسیژن و دماهای بالا مقاوم می باشد . ناپلوئی ( آرتمیای تازه از تخم درآمده ) به علت خصوصیات تغذیه ای که دارد مواد غذایی مناسبی برای محیط های آبی فراهم می آورد و همچنین این موجود درایران به طور سنتی مورد مصرف دارویی قرار می گیرد . گزارشاتی مبنی بر القا خاصیت thermotolerance توسط پروتئین های آرتمیا در سلولهای دیگر پستانداران درشرایط استرس های محیطی وجود دارد.اگرچه تاثیرات پروتئین های آرتمیا بر روی بعضی از سلولهای پستانداران تحت شرایط استرس بررسی شده است اما گزارشی مبنی براثر این پروتئین در شرایط عادی وجود ندارد و نیز پتانسیل بیولوژیکی این پروتئین ها روی سلولهای خونساز مطالعه نشده است . در این مطالعه اثرات اجزا پروتئینی عصاره آرتمیا روی سلولهای رده hl-60 بررسی گردید. سلولهای hl-60 , سلولهای لوسمیایی با کشت سوسپانسیونی هستند که در محیط کشت rpmi-1640 با fbs ?? ? به طور مداوم رشد می کنند. در اینجا آرتمیا در دمای ?? c° وph ? در آاب دریای مصنوعی درحال بهم خوردن برای مدت ?? ساعت انکوبه گردید و hatch شد . عصاره گیری از ناپلوئی ها با روش سونیکاسیون انجام شد و عصاره آرتمیا استخراج شد. کار خالص سازی عصاره خام آرتمیا با ستون کروماتوگرافی تعویض یونی با رزین de52 سفارز انجام گردید. سپس سلولهای60 hl- با رقت های متفاوتی از اجزا بدست آمده از کروماتوگرافی و عصاره خام آرتمیا تیمار گردیدند , انکوباسیون به مدت 96 ساعت در?? c° ,رطوبت ?? % و co2 ?% انجام شد . برای بررسی اثرات عصاره آرتمیا برروی سلولها از روشهای تشخیص پرولیفریشن, تمایز وآپوپتوزیس استفاده گردید و شمارش سلولها با کمک متیل گرین و لام هموسیتومتر انجام شد . برای تعیین افزایش رشد از احیا mtt توسط دهیدروژناز استفاده گردید وبه منظو بررسی افزایش سنتز dna از تست brdu استفاده شد. برای بررسی اثرات تمایز از خاصیت احیا nbt توسط گرانولوسیت ها استفاده گردید . از سلولهای تیمار شده dna استخراج گردید و روی ژل آگارز برده شد تا اثرات آپوپتوزیس حاصل از این عصاره مورد بررسی قرار بگیرد . علاوه بر این ها سلولهای hl-60 تمایز یافته به منظور بررسی اثرات همکاری در تمایز با عوامل القا کننده تمایز با عصاره آرتمیا تیمار شد و تستهای nbt و شمارش انجام گرفت.